Lenti-PacTM HIV 慢病毒包装试剂盒
| 产品货号 | 规格 | 储存条件 |
| LT001/HPK-LvTR-20 | 20 reactions | 4 - 8°C 可保存至少 6 个月, 请注意避免反复冻融。 |
| LT002/HPK-LvTR-40 | 40 reactions |
| LT003/HPK-LvTR-05 | 5 reactions |
试剂盒组成：试剂盒组成及推荐储存环境 (表格内容参照货号 Cat. No. LT001/LT002)
| 试剂盒成分 | 包装规格 | 运输温度 | 保存条件 |
| HIV 混合包装质粒 | 100μl (0.5μg/μl)
200μl (0.5μg/μl) | 常温运输 | 4 - 8°C 可保存至少 6 个月 可根据每次用量，分装保存于-80°C，避免反复冻融。 |
| eGFP 阳性对照质粒 | 约10μg | 常温运输 | 4 - 8°C 可保存至少 12 个月 |
| EndoFectinTM 转染试剂 | 500μl
1ml | 常温运输 | 4 - 8°C 可保存至少 12 个月 |
| TiterBoostTM 滴度 增强剂(500x) | 500μl
1ml | 常温运输 | 4 - 8°C 可保存至少 12 个月 |
产品说明：
HIV（人类免疫缺陷病毒）骨架的慢病毒载体是目前最常用的慢病毒表达载体，它能在体外或体内实验有效介导外源基因转导多种分化或非分化哺乳动物细胞，使外源基因稳定整合靶细胞的基因组，并进行稳定的高水平表达。
GeneCopoeia Lenti-PacTM HIV 慢病毒包装系统是安全性较高的第三代慢病毒包装系统，表达载体自身失活，不产生额外的慢病毒复制。该系统包括：混合包装质粒、EndoFectinTM-Lenti 转染试剂、可
进一步提高滴度的 TiterBoostTM滴度增强剂、以及 eGFP 阳性对照质粒。Lenti-PacTM HIV 慢病毒包装系统可将 HIV载体的慢病毒表达克隆包装成为具有转导效果的慢病毒颗粒，包装所得的慢病毒颗粒可立即使用，介导目的基因在哺乳动物细胞进行高效表达。
GeneCopoeia 提供 40000 多种人源及小鼠源的慢病毒载体 ORF 表达克隆，以及针对人源、小鼠源、大鼠源及其他哺乳类动物染色体组靶基因的慢病毒载体 shRNA 克隆。除此以外，GeneCopoeia同时提供 20000 多种人源慢病毒载体 miRNA 前体表达克隆、miRNA 抑制剂表达克隆以及启动子报告克隆，18000 种小鼠的慢病毒载体启动子报告克隆。以上所有克隆均应用 HIV 骨架，可随时应用于慢病毒包装。
根据疾病控制中心制定的标准，GeneCopoeia 第三代 HIV 慢病毒包装系统满足生物安全第二级别（BSL-2）的要求。
1、删除了 HIV 载体 3’LTR 的 U3 区段增强子，使慢病毒载体自体失活，慢病毒进行转导后无法自行复制，提高使用安全性。
2、5’LTR 上游应用 RSV 启动子，使病毒 RNA 的生产无需依赖 Tat，进一步减少对野生型 HIV 骨架的依赖。
3、对慢病毒表达克隆的包装、复制和转导起关键作用的 HIV 骨架组件降低至 3 个（gag、pol、rev），并分别在 3 个不含包装信号的质粒进行表达；此外，3 个组件与慢病毒载体、VSV-G 表达载体或其它相关载体均无显著同源结构，防止通过同源重组产生可自行复制的病毒。
4、表达 HIV 骨架相关组分（gag、pol、rev）的包装质粒不含包装信号，因此，包装所得的的慢病毒颗粒不含 HIV 骨架相关组分，从而无法自主复制。
包装慢病毒颗粒所需的实验材料
1、GeneCopoeia GCI-L3 化学感受态细胞 (Cat No. CC003)，该细胞系用于扩增慢病毒表达克隆；
2、GeneCopoeia 293Ta 慢病毒包装细胞系(Cat No. LT008/LT009)，亦可选择 HEK 293T/17 细胞系(ATCC Cat No. CRL-11268)，该细胞系用于包装慢病毒颗粒；
3、H1299 细胞系(ATCC Cat No. CRL-5803)或 HT-1080 细胞系(ATCC Cat No. CCL-121)，推荐优先选用 H1299 细胞系；该细胞系用于测定慢病毒滴度、检验转导效果；
4、DMEM 培养液（含葡萄糖、谷氨酰胺、丙酮酸钠），用于培养工具细胞系；
5、胎牛血清，例如 Thermo Scientific (Cat No. SH300700.02)，用于培养工具细胞系；
6、无血清培养液，例如 Invitrogen Opti-MEM I (Cat No. 31985-062/31985-070)；
7、BD Falcon® 5ml 或 14 ml 离心管(Cat No. 352053/352059)。
慢病毒颗粒转导靶细胞所需的实验材料
1、H1299 细胞系(ATCC Cat No. CRL-5803)或 HT-1080 细胞系(ATCC Cat No. CCL-121)，推荐优先选
用 H1299 细胞系；该细胞系用于测定慢病毒滴度、检验转导效果；
2、凝聚胺(Polybrene) ，例如 Sigma-Aldrich（Cat No. H9268)：以 150mM 氯化钠溶解 Polybrene，调
配成 10mg/ml 溶液，过滤除菌，分装贮存于-20℃备用；如需频繁使用，可在使用后存放于 4℃ (4℃
下可保存两个月)；（不是包装必须的）
3、结晶紫(Sigma-Aldrich Cat No. C3886)：溶于 25%乙醇，溶液终浓度为 0.5%（不是包装必须的）
4、青霉素-链霉素双抗，如 Sigma-Aldrich（Cat No. P4333)，用于哺乳动物细胞的转导后培养；
5、用于后续筛选稳转株的抗生素：嘌呤霉素(Invivogen Cat No. ant-pr-1/ant-pr-5)、潮霉素 B(Invivogen
Cat No. ant-hm-1/ant-hm-5)、新霉素(G-418) (Invivogen Cat No. ant-gn-1/ant-gn-5)；
6、BD Falcon
® 5ml 或 14 ml 离心管(Cat No. 352053/352059)。
实验前的准备
在您收到慢病毒载体的表达克隆后，如需马上开始慢病毒包装操作，请先将收到的表达克隆转导至 GeneCopoeia GCI-L3 化学感受态细胞（或具有同等活力的其它感受态细胞系）进行质粒活化；提取质粒 DNA 后，以可靠的 DNA 纯化方法制备去内毒素质粒 DNA，再用于慢病毒包装操作。GeneCopoeia 慢病毒载体的 ORF、shRNA 及 miRNA 表达克隆均含有氨苄青霉素抗性基因，便于进行上述质粒活化及大提步骤。
如您使用的表达克隆是购自 GeneCopoeia™的去内毒素质粒，则可直接用于慢病毒包装实验，不需进行上述的预处理。
注意：表达质粒状态对包装效率有重要影响
必须使用无内毒素的转染级别质粒。可通过 260 nm 光吸收测定 DNA 浓度，并根据 260 nm/280
nm 确定 DNA 纯度（比值在 1.8 ~2.0 范围内为宜），并通过琼脂糖电泳检测 DNA 完整性。
如您使用的表达克隆是新购自 GeneCopoeia™的去内毒素质粒，则不需进行上述处理。如质粒在使用前经历了较长的储存时间，则建议先检测质粒 DNA 状态，再进行包装操作。
注意：包装细胞的生长状态对包装效率有重要影响
必须使用生长状态良好、连续传代的包装工具细胞（293Ta）。请确保细胞培养液无细菌、真菌或支原体污染；如细胞刚从液氮罐取出并复苏，请先让该细胞传代至少两次，再用于慢病毒包装。
