All-in-OneTM miRNA qRT-PCR Detection Kit （miRNA检测试剂盒）
| 产品编号 | 组份 | 体积 | 描述 |
QP015/AOMD-Q020 QP016/AOMD-Q060 | 2.5 U/µl Poly A Polymerase | 1×20 µl
3×(1×20) µl | 在 miRNAs 3’末端加多聚 A 尾（PolyA） |
| RTase Mix | 1×20 µl
3×(1×20) µl | 由M-MLV逆转录酶和RNase抑制剂组成的混合液 |
| 5×PAP/RT Buffer | 1×100 µl
3×(1×100) µl | 包含rATP, dNTP, oligo-dT adaptor RT primer 等 |
| dd H2O
(RNase/DNase free) | 1×1 ml
3×(1×1) ml | DEPC处理水，无RNase、DNase污染 |
| 2×All-in-One
TM qPCR Mix | 2×1 ml
3×(2×1) ml | 包含已优化浓度的 Hot-start DNA 聚合酶、Buffer、dNTP 和 SYBR Green 等 |
| 50×ROX Reference Dye | 1×80 µl
3×(1×80) µl | 根据不同的定量 PCR仪器需求，进行 ROX 校准 |
| 50 µM
Universal Adaptor PCR
Primer
(Tm = 64.5 GC content =
50%) | 1×20 µl
3×(1×20) µl | 用于匹配 miRNA 逆转录中的 adaptor RT primer，与特异 miRNA 的 qPCR 检测上游引物配套使用，可以准确地对 miRNAs 进行定量分析 |
注：该试剂盒-20°C 至少保存 12 个月，请注意避免反复冻融。
产品说明：
MicroRNAs（miRNAs）是一种在转录后水平调节基因表达的非编码小 RNA，长度通常在 18~24
个核苷酸之间。miRNAs 在真核生物中高度保守，控制着许多重要的生理和病理过程，并在细胞发育和分化中起到关键的调节作用。在不同的组织、同一组织的不同发育阶段及多种癌症组织中，miRNAs具有一定的表达差异性。因此，在基础与应用研究中对 miRNA 定量分析具有非常重要的意义。
All-in-OneTM miRNA qRT-PCR Detection System 检测系统利用实时荧光定量 PCR 技术来实现对成熟体 miRNAs 的定量分析，实验过程包括两个主要步骤（详见图 1）。
All-in-One TM miRNA qRT-PCR Detection System 产品优势：
1、仅需一步反应即可将 miRNA 逆转录成第一链 cDNA。
2、提供了一种准确并且快速定量 miRNAs 表达谱分析的方法。
3、独特的 miRNA 引物设计技术及其优化的反应体系避免了非特异性扩增、特别是 Pre-miRNA 的
All-in-One™ miRNA qRT-PCR Detection System 使用说明书污染。
4、配套使用经验证的特异性 miRNA 检测引物、miRNAs 表达克隆及其他工具，可以实现完整的miRNAs功能研究。
5、All-in-OneTM miRNA qRT-PCR Detection System 是基于 SYBR Green 染料法的 qPCR 检测系统，可用于从一次合成反应的 cDNA 中同时检测多种 miRNAs，不仅减少了误差、节约了样品，同时还实现了检测的高通量。
实验前准备：注意！在处理化学制品前，请穿戴实验服、一次性手套和护目镜。
1、RNA 样品准备
避免溶剂、耗材及实验器具中污染RNase，对于RNA相关实验是至关重要的。在准备RNA样品全过程中，需要戴上口罩和手套。小心仔细的按照所选的RNA提取流程进行操作。实验中可购买无RNase的即用型试剂进行实验，或者将溶剂用0.1%DEPC（焦碳酸二乙酯）处理后再经过高压灭菌亦可。实验器具上的RNase可经过250°C干热灭菌3小时灭活。包括微量离心管、移液器吸头等全部耗材用DEPC处理后，再经过高压灭菌以灭活RNase方可使用，同样可购买无RNase的耗材产品使用。
2、引物设计
检测试剂盒 All-in-One™ miRNA qRT-PCR Detection Kit 及 All-in-One
TM miRNA qPCR Kit 均配有下游通用引物 “Universal Adaptor PCR Primer” (Tm = 64.5, GC% = 50%)
特异的 miRNA 检测上游引物可自行设计，也可通过我们订购，更多信息请咨询。
成熟体 miRNAs 长度通常在 18~24 个核苷酸之间，被称为”微小 RNA”。特异的上游引物可以通过 miRNAs 序列直接设计，但是一些特殊的困难结构 miRNA（比如高、低 Tm 值或高度同源性的 miRNAs，一些来自特殊组织（比如 pre-miRNA 或 pri-miRNA 高度表达）的 miRNAs，在进行引物设计时需要进行设计优化，以便得到特异扩增的 miRNA 检测上游引物。
注意事项：
- 为保证使用效果，试剂盒保存于-20 °C，避免储存或放置于 4°C 或室温条件下。
- 轻柔颠倒离心管数次以使试剂混合均匀，避免产生泡沫，短暂离心后备用。
- 按照实验流程进行操作，避免 RNase 污染。
- 所有反应的准备过程在冰上进行，避免 RNA 的降解。
相关产品：我们提供一整套 miRNA 研究的完整解决方案，其相关的产品如下表所示。
| 产品 | 描述 |
| miExpressTM miRNA 前体表达克隆 | 预制的 750 个人源, 450 个小鼠源和 270 个大鼠源 miRNA 前体表达克隆，可以用于研究 miRNA 在基因表达中的调控作用。 |
| miTargetTM miRNA 靶标表达克隆 | 预制的 20,000 个人源和 15,000 个小鼠源 miRNA 靶标表达克隆 ，可以用于 miRNA 功能研究。 |
| miArrestTM miRNA 抑制子表达克隆 | 预制的 750 个人源，450 个小鼠源和 270 个大鼠源 miRNA 抑制子表达克隆，可以用于 miRNA 功能研究。 |
| OmicsLinkTM Expression-Ready
ORF cDNA Clones | 预制的 20,000 个人源和 15,000 个小鼠源 ORF 表达即用型克隆，可以用于基因功能获得或缺失研究。 |
| All-in-OneTM miRNA qPCR 引物 | 预制的 1700 个人源，800 个小鼠源和 400 个大鼠源验证的 miRNA qPCR引物，可以用于稳定的、可重复、可靠的 miRNA 定量分析。 |
| EndofectinTM 系列转染试剂 | 细胞毒性低、转染效率高，广泛用于常见细胞系。 |
