GreenView DNA Gel Stain, 10,000X in H2O (核酸荧光染料)

Ex/Em: 500/530 nm                 For Research Use Only

一、试剂盒说明

GreenView DNA Gel Stain 是一种安全无毒及环保的用于检测琼脂糖凝胶以及丙烯酰胺凝胶中的绿色核酸荧光染料。使用者可以选择在制备凝胶过程中预先加入染料（前染法）或者跑完电泳之后再进行染色（后染法）。GreenView Plus DNA Gel Stain 可以匹配 254nm或者 300nm 紫外透射仪及蓝光透射仪，也可以用于匹配了可见光激发器如 488nm 激光器的凝胶成像仪。

本产品是 10,000X 的 GreenView DNA Gel Stain 浓缩液，采用前染法可以作 10,000 倍稀释，用于后染法可以 5,000 倍稀释。1 管10,000X 溶液至少可以用于染色 100 张迷你胶。

GreenView Plus DNA Gel Stain 染料可以与后续的胶回收和克隆实验兼容。GreenView Plus DNA Gel Stain 可以通过酚/氯仿抽提以及乙醇沉淀的方法很高效地从 DNA 中去除掉。

二、 操作说明

1、后染法

1.1、根据您的实验步骤进行核酸的凝胶电泳。

1.2、用 TE、TBE 或者 TAE 缓冲液稀释 10,000X GreenView DNA Gel Stain 5000 倍，配为 2X GreenView DNA Gel Stain 染色液。

1.3、小心地将凝胶转移至聚丙烯容器中，缓缓倒入足量的 2X GreenView DNA Gel Stain 染色液，保证浸没胶体。

1.4、室温下，缓慢轻摇凝胶，染色 30 分钟。

1.5、以去离子水洗去多余的染料，用凝胶成像仪或者激光扫描仪成像，选用 488nm 滤光片。

2、前染法

2.1、根据您的实验情况，制备合适的热琼脂糖凝胶溶液。

2.2、按 1：10,000 比例加 10,000X GreenView DNA Gel Stain 到溶化的琼脂糖溶液中，彻底摇匀。

2.3、制胶，静待凝固。

2.4、根据您的实验，进行上样电泳。

2.5、用凝胶成像仪或者激光扫描仪成像，选用 488nm 滤光片。

注意事项：前染法不适用于聚丙烯酰胺凝胶。对于聚丙烯酰胺凝胶推荐使用后染法。

三、疑难解答

问题：前染法出现拖尾的 DNA 条带

建议：1.降低 DNA 上样量，这种情况可能是因为过量 DNA 上样造成。

2.用后染法代替前染法。
3.对于大片段 DNA 可以考虑利用更低浓度的琼脂糖凝胶。  
4.更换电泳 buffer，TBE 缓冲能力要强于 TAE。

问题： 前染法 DNA 迁移结果不符合预期

建议：1. 降低 DNA 上样量。

2. 降低染料用量，如使用 0.5X 浓度。
3. 用后染法代替前染法。

问题：弱荧光信号

建议：1.溶液中的染料可能有沉淀析出，涡旋振荡使之重溶。

2.增加所使用的染料用量，如前染时使用 2X 浓度。

四、常见问题

1、问题：GreenView DNA Gel Stain 可以用于染 ssDNA 或 RNA 吗？

答案：可以。但我们推荐使用灵敏度更高的 GreenView Plus DNA Gel Stain。

2、问题：GreenView DNA Gel Stain 染色之后样品可以用于做后续的克隆、连接和测序实验吗？

答案：可以的。我们推荐使用 Qiagen 或 Zymo 胶回收试剂盒或者酚氯仿方式抽提 DNA，可以将染料去除。

3、问题：GreenView DNA Gel Stain 是否可用于Southern 或者Northern blotting 实验吗？

答案：GreenView Plus DNA Gel Stain 还没有做过 blotting 方面的实验。

4、问题： GreenView DNA Gel Stain 染色液可以重复使用吗？

答案：我们不推荐重复使用，在重复使用时由于染料浓度降低荧光信号会减弱。

5、问题：GreenView DNA Gel Stain 的检测值灵敏度是多少？

答案：有客户给我们的结果是可以检测小于 0.5 ng 的 DNA。 但是，检测的灵敏度还取决于所使用的仪器和曝光时间等设置。

6、问题：需要避光使用 GreenView DNA Gel Stain 吗？

答案：使用时可在室光下操作，避光保存。