RayBiotech芯片常见疑问（一）

一 、半定量和定量芯片的差异

1、检测原理和载体的不同：

A、半定量芯片目前有夹心法和标记法半定量芯片，且载体有膜的和玻片的。

B、定量芯片目前只是采用夹心法，且载体只有玻片。

2、抗体阵列的数量：

定量芯片底部没有barcode(即白色的条码),且16个孔每个孔都点有抗体阵列,而半定量芯片一般都是上半部分4或8个孔点有抗体,或者16个孔都点有抗体阵列。

3、抗体重复点：

定量芯片每个抗体点都是4个重复点，半定量芯片是2个或4个重复点。

4、检测性能的差异：

半定量夹心法芯片和定量芯片检测原理都相同，唯一的不同是定量芯片试剂盒中包含一个混合的标准品（多种标准品混合在一起），如同ELISA一样将标准品梯度稀释以后，在定量芯片上用8个孔检测梯度标准品，其余8孔检测 样品，试验操作完成后将标准品系列中对应的每个因子的 标准曲线画出来，与样品中每种因子的信号值进行比对， 完成定量。定量芯片就是多重的ELISA,可以替代传统单一的ELISA。半定量夹心法芯片与定量芯片试验操作完成后得到的图像和从图像中提取的信号值都是相似的，但是半定量芯片没有标准曲线，没有办法与标准曲线去比对得到 样品中因子的确切含量，但是可以半定量芯片的信号值比对样品之间因子含量是否有差异，筛选出组间的差异表达因子,进一步选择合适的精确定量分析来验证。

二、Protein Array的原理

蛋白芯片与其他抗体芯片系列不同的是蛋白芯片是将蛋白多肽点在载体上的，而不是抗体。蛋白芯片主要是用于检测蛋白-蛋白之间相互作用，蛋白-小分子相互作用，抗体特异性和自身抗体的检测。

1、蛋白-蛋白相互作用

将蛋白点在载体上，有三种方式实现蛋白-蛋白相互作用的检测：

(1)载体上的蛋白和样品中的目标蛋白结合，然后加入目标蛋白的抗体孵育,然后再加入标记的抗种属二抗 （例如抗小鼠、抗大鼠、抗兔子、抗人），最后通过化 学发光或者荧光实现信号检测。

(2) 载体上的蛋白和样品中的融合蛋白结合，融合蛋白结合有tag, 通过抗tag的抗体实现信号检测。

(3) 载体上的蛋白和样品中生物素标记的蛋白结合，直接通过HRP/Fluor-链霉亲和素实现信号检测。

2、小分子-蛋白相互作用

(1) 载体上的蛋白和样品中的目标小分子结合，然后加入标记的抗小分子的抗体，最后通过化学发光或者荧光实现信号检测。

(2) 载体上的蛋白和样品中的与蛋白偶联的小分子结合,通过抗蛋白的抗体实现信号检测。

(3) 载体上的蛋白和样品中标记的小分子结合,直接实现信号检测。

3、抗体特异性和自身抗体的检测

(1) 载体上的蛋白和样品中的自身抗体结合，然后加入标记二抗(抗抗体)，最后通过化学发光或者荧光实现信号检测。

(2) 载体上的蛋白和样品中标记的抗体结合，直接实现信号检测。