蛋白质芯片操作复杂吗,有哪些注意事项

1、玻片芯片的操作

芯片的操作与ELISA操作相似，首先加封闭液将芯片封闭，抽去封闭液后加样品孵育、清洗、加二抗孵育、清洗、加荧光剂，清洗后扫描即完成实验操作过程。玻片、芯片可以使用全自动芯片操作仪进行操作和清洗，减少人工操作误差。

A、玻片的干燥

将玻片芯片从盒子中取出来，在室温平衡20-30 min后，将包装袋打开，揭开密封条，然后将芯片放在真空干燥器或者室温干燥1-2小时，干燥不完全信号点可能会产生拖尾现象。

B、样品的准备

玻片芯片非常灵敏，吸附性很好，样品基质或者其中的杂质非常容易引起玻片背景高，所以样品要首先离心，最好是10000rpm 冷冻离心5min，将杂质沉淀或者一些油脂层离心去掉，只抽取清亮的样品。

对于血清，要避免溶血，溶血的血清在玻片上会引起很高的背景，且可能影响部分因子的检测结果。

细胞培养上清，一般建议收集低血清培养基，可含有低于2%的FBS。

由于玻片的强吸附性，细胞裂解液和组织裂解液在玻片上最容易引起较高的背景，所以夹心法玻片芯片一 般推荐2mg/ml以上蛋白浓度的细胞和组织裂解液，且要稀释5-10倍后上样,建议上样浓度为500ug/ml。

C、玻片芯片的孵育和清洗

     Ÿ 所有需要相互比较的样品，要在同一次相同条件的试验中 一起完成，如果样品量太大，无法一次操作完成时，需要做一个参照样品，且尽量保持两次或者几次试验的条件完 全一致；

 Ÿ 操作实验时候，请戴上橡胶手套（不掉粉末），以免污染试剂和玻片；

 Ÿ 样品和试剂加样过程中，保证样品和试剂快速的覆盖住玻片，试验过程中不能使玻片干燥；

 Ÿ 孵育过程中避免产生气泡；

 Ÿ 孵育和初次样品清洗时避免附近孔的交叉污染，邻近孔的 液体避免溢出污染；

 Ÿ 玻片芯片的每次清洗都要将液体吸干净，不要残留在角落，尤其是清洗样品的时候，一定要吸干净，否则残留样品会引起高的背景。

D、玻片芯片拆框架和扫描

不能触摸玻片的正面，因为玻片芯片非常灵敏，只能接触玻片的边缘，将玻片两侧的搭扣边拆开后，从玻片芯片的底部开始将框架和玻片分离，手不能接触到有芯片的地方。

B、膜芯片的孵育和清洗

 Ÿ 所有需要相互比较的样品，要在同一次相同条件的试验中一起完成，如果样品量太大，无法一次操作 完成时，需要做一个参照样品，且尽量保持两次或 者几次试验的条件完全一致；

 Ÿ 用镊子来进行膜的操作，用镊子夹住膜的边缘或者用镊子托起膜，避免夹在膜上有抗体的地方，膜比 较脆，容易夹破，操作过程要保持轻柔；

 Ÿ 整个试验过程中膜芯片不能干燥；

 Ÿ 避免用手、枪头、或者任何尖锐的工具接触到膜；样品或者试剂要将膜全部覆盖，孵育过程中要将孵 育盒的盖子盖上，可以使用塑料薄膜包住孵育盒， 避免灰尘和样品的蒸发；

 Ÿ 加样和孵育过程中避免气泡

C、膜芯片显色和拍照

 Ÿ 在加发光剂的时候，要快速的将发光剂覆盖住 整个膜，且拿在手上不断摇晃2min，保证发光剂覆盖均匀（如果是胶片压片，保证发光剂浸 到膜的每个角落，且覆盖均匀）；

 Ÿ 所有一批试验的样品（或者一个组分的样品，这些样品要在一起比较）要保证相同的曝光时间（最好在同一张塑料片上同时拍照或者同一 张胶片上一起压片），不能一次完成，一定要保证同样的反应时间和曝光时间。