RayBiotech抗体芯片在炎症反应研究中的应用

杂志名称：Scientific Reports

文献题目：Xiang N, Liu J, Liao Y, et al. Abrogating ClC-3 Inhibits LPS-induced Inflammation via Blocking the TLR4/NF-κB Pathway[J]. Scientific reports, 2016, 6.

第一作者：Xiang N

作者单位：Department of Pharmacology, Medical College, Jinan University, Guangzhou 510632, China

本实验所用产品：RayBiotech小鼠AAM-INF-G1抗体玻片芯片（40个炎症因子抗体芯片）

实验样品：细胞培养上清

研究背景：

　　炎症是临床常见的一个病理过程，可以生于机体各部位的组织和各器官，例如毛囊炎、扁桃体炎、肺炎、肝炎、肾炎等。急性炎症平时具有红、肿、热、痛、机能掩藏等变化，同随时常伴有发热、白细胞增多等全身反应。失控的炎症反应可引起一系列疾病的发生发展，是一些重大疾病的先决条件。脂多糖（LPS），革兰阴性菌的外膜结构的一个组成部分，是一种免疫系统最有效的刺激物，被认为是造成全身性炎症综合症的主要原因。4,4’ -Diisothiocyanostilbene-2,2’-二磺酸 (DIDS)是一种氯离子通道阻碍剂，氯通道在不同的过程中起着重要的作用，如血压调节、细胞周期和细胞凋亡、肌肉张力、突触传递和细胞兴奋性等，参与多种生物机能反应及疾病发生。研究表明，DIDS可抑制LPS诱导的炎症反应。CIC-3基因与炎症反应密切相关，是NF-κB信号通路必不可少的调节者。本文旨在研究CIC-3基因如何影响LPS诱导的炎症反应。

1 结果

1.1 分组

空白对照--CTRL

LPS组--LPS

LPS+DIDS组--LPS+DIDS

LPS+CIC-3 siRNA组--LPS+CIC-3 siRNA

1.2 RayBiotech芯片检测LPS诱导及CIC-3基因沉默后的炎症因子表达变化

　　为了研究CIC-3是通过调控哪些炎症因子的表达抑制LPS诱导的炎症反应，采用以上4组细胞培养上清用RayBiotech 夹心法抗体芯片AAM-INF-G1进行检测，筛选对照组细胞与实验组细胞之间的差异表达因子。芯片数据分析结果显示，IL1-α, IL1-β, IL-6 和 TNF-α 4个蛋白在LPS诱导组中高表达，DIDS抑制或CIC-3沉默后这4个蛋白表达水平降低。

1.3. 表达差异因子验证

      Western blot验证结果与芯片结果一致。

1.4 TLR4/NF-κB信号通路检测

结论：

    RayBiotech芯片筛选出IL1-α, IL1-β, IL-6 和 TNF-α 4个蛋白在LPS诱导组中高表达，DIDS抑制或CIC-3沉默后这4个蛋白表达水平降低，且Western blot验证结果与芯片结果一致。这4个蛋白为促炎因子，在LPS诱导组中高表达，DIDS抑制或CIC-3沉默后表达水平恢复到正常组水平，表明LPS通过高表达IL1-α, IL1-β, IL-6 和 TNF-α 4个促炎因子促使巨噬细胞发生炎症反应，而CIC-3基因沉默则是通过抑制这四个促炎因子的表达来抑制炎症反应，进而阐明了LPS和CIC-3的促炎症机制，对研究炎症反应机制及炎症治疗有重要意义，RayBiotech芯片在该研究中起到至关重要作用。