Raybiotech抗体芯片在龙血树提取物抑制鳞状口腔上皮癌研究上的应用

杂志名称：BioMed Research International

文献题目：Alabsi A M, Lim K L, Paterson I C, et al. Cell cycle arrest and apoptosis induction via modulation of mitochondrial integrity by Bcl-2 family members and caspase dependence in dracaena cinnabari-treated H400 human oral squamous cell carcinoma[J]. BioMed research international, 2016, 2016.

第一作者：Alabsi A M

作者单位：Department of Oral Biology and Biomedical Sciences, Faculty of Dentistry, University of Malaya, 50603 Kuala Lumpur, Malaysia

本实验所用产品：RayBiotech人AAH-APO-1抗体芯片（43个凋亡相关细胞因子抗体芯片）

实验样品：细胞裂解液

研究背景：

　　口腔鳞状细胞癌（OSCC）在全球癌症发病率中排行第六，主要由吸烟和喝酒引起。尽管手术及放化疗技术已经有了很大进展，OSCC病人的预后依然较差，尤其对于那些晚期病人。从自然中提取的化学物质有望应用于肿瘤治疗。但天然药物的分析分为很多步骤，第一步是对有效成分进行提取，并进行分离和鉴定。通过将分离产物进行生物分析，挑选有效成分进入下一步分离，有助于最终有效成分的获取。

　　龙血树是也门索科特拉岛的一种有红色树脂的特色树种。当地人把它用于外伤，腹泻，发热，虽然已经有不少关于其在治疗方面的研究，但对其在细胞毒性及抗肿瘤活性方面的研究仍然很少。本篇文献将采用人上皮鳞状细胞癌细胞株来对龙血树的提取物进行测试，进而研究其细胞毒性及凋亡诱导能力。

1 结果

1.1 龙血树活性成分的提取  

将50克龙血树脂溶于500ml甲醇，上清经过过滤浓缩后通过层析及HPLC的方法进行分离。

1.2 RayBiotech芯片检测被处理后的凋亡相关蛋白表达水平

　　为了研究在被龙血树提取物处理之后的细胞哪些凋亡通路被激活。对龙血树提取物最敏感的H400细胞株被用来作为实验对象。1×105 cells/mL的细胞被移植到96孔板中，并分别用龙血树提取物原液及各阶段分离物进行72小时的处理。72小时候收集细胞，用冰PBS缓冲液洗涤后进行裂解，并用芯片进行检测。

后续的荧光实验也验证了这一结果

结论：

　　龙血树提取物可以有效且特异性地诱导H400细胞株凋亡。研究人员观察到磷脂酰丝氨酸的暴露，线粒体膜电势（MMP）去极化，caspases 3/7/9的激活以及S期阻滞等一系列和凋亡相关的证据。通过蛋白芯片的分析发现Bcl-2家族中Bax，Bad，Bid的上调以及Bcl-2的下调是导致MMP去极化的主要原因。