RayBio抗体芯片在硅肺病人免疫内环境稳定研究中的应用

杂志名称：Front Immunol

文献题目：Chen Y, Li C, Lu Y, et al. IL-10-Producing CD1dhiCD5+ Regulatory B Cells May Play a Critical Role in Modulating Immune Homeostasis in Silicosis Patients[J]. Frontiers in immunology, 2017, 8.

第一作者：陈英

通讯作者：陈杰

作者单位：中国医科大学，公共卫生学院，沈阳

本实验所用产品：RayBio人 QAH-CAA-440抗体芯片（440个炎症、趋化、生长、血管等细胞因子抗体芯片）

实验样品：血清

研究背景：

矽肺又称硅肺，是尘肺中最为常见的一种类型，是由于长期吸入大量游离二氧化硅粉尘所引起，以肺部广泛的结节性纤维化为主的疾病。矽肺是尘肺中最常见、进展最快、危害最严重的一种类型。我国每年有2万例左右的尘肺新患者出现。因此，尘肺的防治是一项艰巨的工作。然而，硅肺病发生发展的细胞及分子水平机理尚未清楚。据报道，先天及后天的免疫应答在硅肺的发病机理中起到关键作用。为了进一步揭示硅肺发病的分子机制，本文采用高通路蛋白芯片技术，寻找硅肺发病机制的关键性分子，为硅肺治疗提供新的思路。

1 分组

血清样本：

硅肺病人（SP，n=19）

接触工人（SS，n=19）

健康工人（HW，n=19）

2 结果

2.1 RayBiotech芯片筛选SP血清标记物

为了寻找硅肺病人的血清标记物，采用RayBiotech 夹心法抗体芯片QAH-CAA-440对SP, SS和HW三组进行盲筛，检测血清中的440个蛋白表达水平。数据采用Student’s T检验，P<0.05为显著性差异因子，FC为两组信号平均值倍数比。芯片数据分析结果显示，46个因子在SP和SS之间有显著差异。18个因子在SP和HW之间有显著差异。56个因子在SP, SS和HW三组间有显著差异。其中，与SS组比较，SP组的IL-10水平显著性升高（p value=0.00001）；与HW组比较，SP组的IL-10水平显著性升高（p value=0.00082）。这些结果显示IL-10可能在硅肺病的发生发展中起到极其重要的作用。

2.2  SP组的血清IL-10，CD19+IL-10+ Breges细胞水平升高

为了探索SP组水平升高的IL-10是由哪种细胞分泌，本研究采用流式细胞仪对三组的外周血单个核细胞进行检测。结果显示，与SS和HW组比较，分泌IL-10的CD1dhiCD5+Breges细胞数在SP组显著升高，而分泌IL-10的淋巴细胞数在SP组没有显著差异。这些结果提示在SP组升高的血清IL-10可能是由B10s细胞分泌而来。

2.3 SP组的Tregs水平升高

为了验证Bregs细胞是否在SP中影响炎症因子的产生和维持Tregs细胞，采用Bio-Plex方法和流式细胞术进行检测。结果显示，炎症因子IL-1beta，IL-6和TNF-alpha在三组间表达没有显著差异，而与SS和HW组比较，Tregs细胞在SP组显著升高。这些结果提示Bregs在SP组中可能抑制炎症因子的产生和促进Tregs细胞增殖。

3 结论

本文通过使用RayBiotech的夹心法芯片检测临床样本，通过盲筛检测硅肺病人，接触无硅肺病工人，健康人的血清，筛选出56个因子在SP, SS和HW三组间有显著性表达差异，其中包括IL-10。而本文的前期研究发现，分泌IL-10的B细胞参与硅诱导的小鼠肺炎症及肺纤维化。流式细胞术进一步发现硅肺病人外周血中分泌IL-10的CD1dhiCD5+ Breges细胞数显著升高，而分泌IL-10的淋巴细胞数没有变化。炎症因子IL-1beta，IL-6和TNF-alpha在三组间表达没有显著差异。而与SS和HW组比较，Tregs细胞在SP组显著升高。这些结果表明分泌IL-10的CD1dhiCD5+ Breges细胞在维持硅肺病人免疫内环境稳定起到关键作用。RayBiotech芯片在该研究中起到最至关重要作用。