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RayBio抗体芯片在硅肺病人免疫内环境稳定研究中的应用

作者:Raybio浏览数:44 


杂志名称:Front Immunol


文献题目:Chen Y, Li C, Lu Y, et al. IL-10-Producing CD1dhiCD5+ Regulatory B Cells May Play a Critical Role in Modulating Immune Homeostasis in Silicosis Patients[J]. Frontiers in immunology, 2017, 8.


第一作者:陈英


通讯作者:陈杰


作者单位:中国医科大学,公共卫生学院,沈阳


本实验所用产品:RayBio人 QAH-CAA-440抗体芯片(440个炎症、趋化、生长、血管等细胞因子抗体芯片)


实验样品:血清


研究背景:

矽肺又称硅肺,是尘肺中最为常见的一种类型,是由于长期吸入大量游离二氧化硅粉尘所引起,以肺部广泛的结节性纤维化为主的疾病。矽肺是尘肺中最常见、进展最快、危害最严重的一种类型。我国每年有2万例左右的尘肺新患者出现。因此,尘肺的防治是一项艰巨的工作。然而,硅肺病发生发展的细胞及分子水平机理尚未清楚。据报道,先天及后天的免疫应答在硅肺的发病机理中起到关键作用。为了进一步揭示硅肺发病的分子机制,本文采用高通路蛋白芯片技术,寻找硅肺发病机制的关键性分子,为硅肺治疗提供新的思路。


1 分组

血清样本:

硅肺病人(SP,n=19)

接触工人(SS,n=19)

健康工人(HW,n=19)


2 结果


2.1 RayBiotech芯片筛选SP血清标记物

为了寻找硅肺病人的血清标记物,采用RayBiotech 夹心法抗体芯片QAH-CAA-440对SP, SS和HW三组进行盲筛,检测血清中的440个蛋白表达水平。数据采用Student’s T检验,P<0.05为显著性差异因子,FC为两组信号平均值倍数比。芯片数据分析结果显示,46个因子在SP和SS之间有显著差异。18个因子在SP和HW之间有显著差异。56个因子在SP, SS和HW三组间有显著差异。其中,与SS组比较,SP组的IL-10水平显著性升高(p value=0.00001);与HW组比较,SP组的IL-10水平显著性升高(p value=0.00082)。这些结果显示IL-10可能在硅肺病的发生发展中起到极其重要的作用。

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2.2  SP组的血清IL-10,CD19+IL-10+ Breges细胞水平升高

为了探索SP组水平升高的IL-10是由哪种细胞分泌,本研究采用流式细胞仪对三组的外周血单个核细胞进行检测。结果显示,与SS和HW组比较,分泌IL-10的CD1dhiCD5+Breges细胞数SP组显著升高,而分泌IL-10的淋巴细胞数在SP组没有显著差异。这些结果提示在SP组升高的血清IL-10可能是由B10s细胞分泌而来。

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2.3 SP组的Tregs水平升高

为了验证Bregs细胞是否在SP中影响炎症因子的产生和维持Tregs细胞,采用Bio-Plex方法和流式细胞术进行检测。结果显示,炎症因子IL-1beta,IL-6和TNF-alpha在三组间表达没有显著差异,而与SS和HW组比较,Tregs细胞在SP组显著升高。这些结果提示Bregs在SP组中可能抑制炎症因子的产生和促进Tregs细胞增殖。

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3 结论

本文通过使用RayBiotech的夹心法芯片检测临床样本,通过盲筛检测硅肺病人,接触无硅肺病工人,健康人的血清,筛选出56个因子在SP, SS和HW三组间有显著性表达差异,其中包括IL-10。而本文的前期研究发现,分泌IL-10的B细胞参与硅诱导的小鼠肺炎症及肺纤维化。流式细胞术进一步发现硅肺病人外周血中分泌IL-10的CD1dhiCD5+ Breges细胞数显著升高,而分泌IL-10的淋巴细胞数没有变化。炎症因子IL-1beta,IL-6和TNF-alpha在三组间表达没有显著差异。而与SS和HW组比较,Tregs细胞在SP组显著升高。这些结果表明分泌IL-10的CD1dhiCD5+ Breges细胞在维持硅肺病人免疫内环境稳定起到关键作用。RayBiotech芯片在该研究中起到最至关重要作用。


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